Xamirturushlarni ifodalovchi rekombinant oqsillarni aniqlashtirish va ultrafiltrlash uchun samarali va arzon jarayon.

Ekzogen genlarning xamirturush ifodasi nafaqat rekombinant oqsillar va peptidlar, antikorlar va vaktsinalar, sitokinlar, o'sish omillari, gormonlar va boshqa bioaktiv moddalarni ishlab chiqarishi mumkin, balki sanoat fermentlari, funktsional oziq-ovqat va biologik materiallarni ishlab chiqarish uchun ham ishlatilishi mumkin, bu esa keng qo'llanilishi mumkin. .

 

Xamirturushlarni ifodalash tizimi ikkita tez-tez ishlatiladigan ekspresyon tizimini o'z ichiga oladi, ya'ni saccharomyces cerevisiae ifoda tizimi va metanotrofik xamirturush ifodalash tizimi. Metanol xamirturush ifodalash tizimi hozirgi vaqtda eng ko'p ishlatiladigan xamirturush ifodalash tizimidir va Pichia eng ko'p ishlatiladigan, metanolni uglerod va energiya sifatida ishlatishi mumkin. Bundan tashqari, Hansenning xamirturushi, Sphaeroides va boshqalar mavjud.

 

Xamirturushlarni ifodalash tizimi qanday bo'lishidan qat'i nazar, uning quyi oqimdagi ajratish va tozalash jarayonlari o'xshashdir va maxsus jarayon oqimi misol sifatida rekombinant oqsillar va polipeptid preparatlarining xamirturush ifodasini oladi.

 

Yo'naltiruvchi mikrofiltratsiya membranasi kassetalari ochiq oqim kanali va tangensial oqim filtrlash rejimini qabul qiladi, bu xamirturush fermentatsiyasi suyuqligi va E. coli yorilish suyuqligi kabi murakkab ozuqa suyuqligini yuqori tezlikda samarali qayta ishlashga imkon beradi va kichik sinovdan ishlab chiqarish miqyosigacha chiziqli kuchaytirilishini ta'minlaydi. Yilni modulli dizayn, oddiy quvur liniyasi ulanishi, tizimning mustaqilligi va o'qilishi operatorlarni himoya qilishi va biologik ifloslanishning oldini oladi. Va parvarishlash va tozalash tekshiruvi yo'q. Shuning uchun, u erta quyida qayta ishlashning aniqlashtirish bosqichi uchun juda mos keladi.

 

UF/DF jarayonining asosiy maqsadi aralashmalarni olib tashlash va buferlarni siqib chiqarishdir. Yo'naltiruvchi ultrafiltratsiyali membrana kassetasi membrana gözenek hajmining yaxshi bir xilligiga va kuchli gidrofillikka ega, bu membranaga yuqori oqim va past protein adsorbsiyasini ta'minlaydi va optimallashtirilgan oqim kanali dizayni, kichikroq bosim tushishi, materialni oson o'tkazish va filtrlash vaqtini sezilarli darajada qisqartiradi. Bundan tashqari, mahsulot seriyasi turli miqyosdagi turli xil ilovalar ehtiyojlarini qondirish uchun to'liq va moslashuvchan. Shuning uchun u quyi oqimdagi ishlov berishning UF/DF bosqichi uchun juda mos keladi.

 

Quyida Guidling membranasini qo'llash holati keltirilgankassetarekombinant oqsillarning xamirturush ifodasida.

 

Mikrofiltratsiyani aniqlashtirish

Biz 1,5 l xamirturush fermentatsiyasi suyuqligini (maqsadli oqsil molekulyar og'irligi 42-55 KD) mikrofiltratsiya orqali tozalash uchun {0}}.11 kvadrat metr 0,22 mkm gözenekli membrana kassetasidan foydalandik. Mikrofiltratsiyaning butun jarayonida maqsadli oqsilning tiklanish tezligi, loyqalikning o'zgarishi va membrana oqimining kamayishi o'rganildi.

0-17min - konsentratsiya jarayoni, 17-32daq - yuvish va filtrlash jarayoni. Butun mikrofiltratsiya jarayonida TMP asta-sekin o'sib bordi, suyuqlikning kirish tezligi o'zgarishsiz qoldi va o'rtacha material oqimi 45LMH edi.

Suyuqlikning loyqaligi mikrofiltratsiyadan oldin 600NTU va mikrofiltratsiyadan keyin 8NTU edi va loyqalik aniq o'zgardi.

Natijalar maqsadli oqsilning hosildorligi > 90% ekanligini ko'rsatdi. Guidling Technology 0,22 mkm membrana kassetasi barqaror va ushbu dastur stsenariysi uchun mos keladi.

 

Ultrafiltratsiya kontsentratsiyasi

 

 

Natijalar maqsadli oqsilning to'liq ushlanganligini ko'rsatdi. Guidling Technology 10kd membranali kassetalar barqaror ishlashi mumkin va ushbu dastur stsenariysi uchun mos keladi.

Xamirturush bilan ifodalangan rekombinant oqsillarning aksariyati yuqori darajada ifodalanmagan. Filtrlangan suyuqlikning loyqaligi aniq kamaydi va oqsilni qayta tiklash darajasi yuqori bo'ldi. Keyingi xromatografik vaqt juda uzoq bo'lgani uchun u oqsilga salbiy ta'sir ko'rsatadi, xromatografik namuna olish vaqtini qisqartirish uchun ultrafiltratsiya kontsentratsiyasining bir bosqichi qo'shilishi mumkin va maqsadli protein namunadan keyin tezda konsentratsiyalanishi mumkin. vaqtni tejash, to'ldiruvchi hajmini kamaytirish va shu bilan ishlab chiqarish tannarxini kamaytirish maqsadiga erishish.

 

Guidling Technology mikrofiltratsiya membrana kassetalari odatda ozuqa suyuqligining loyqaligini 20NTU dan kamroq darajaga tushirishi mumkin, bu esa keyingi ultrafiltratsiya va xromatografiya ehtiyojlarini to'liq qondiradi. Ultrafiltratsiyali membrana kassetalarining ultrafiltratsiyadan tiklanish darajasi turli materiallarga qarab o'zgaradi, umumiy tiklanish darajasi 90-95% ga yetishi mumkin.

Guidling Technology sizni tegishli baholash uchun test to'plamlarini so'rashingizni taklif qiladi.

 

Guidling haqida

Guidling Technology - bu biofarmatsevtika, hujayra madaniyati, biomeditsina, diagnostika va sanoat suyuqliklarini tozalash va kontsentratsiyasiga qaratilgan milliy yuqori texnologiyali korxona. Biz santrifüj filtr qurilmalari, ultrafiltratsiya va mikrofiltratsiya kassetalari, virus filtri, TFF tizimi, chuqurlik filtri, ichi bo'sh tolalar va boshqalarni muvaffaqiyatli ishlab chiqdik. Ular biofarmatsevtika, hujayra madaniyati va boshqalarni qo'llash stsenariylariga to'liq javob beradi. Bizning membranalarimiz va membrana filtrlarimiz konsentratsiya, ekstraktsiya va oldindan filtrlash, mikrofiltratsiya, ultrafiltratsiya va nanofiltratsiyani ajratishda keng qo'llaniladi. Kichik, bir martalik laboratoriya filtrlashdan ishlab chiqarish filtrlash tizimlariga, sterillik sinovlari, fermentatsiya, hujayra madaniyati va boshqalarga qadar ko'plab mahsulot liniyalarimiz sinov va ishlab chiqarish ehtiyojlarini qondiradi. Guidling Technology siz bilan hamkorlik qilishni intiqlik bilan kutmoqda!