SP Kuchli kation almashinuvi membranasi xromatografiyasi

CM zaif ioniga kirish-Membran xromatografiyasi mahsulotlari almashinuvi

 

1. Umumiy ko‘rinish

CM zaif kation-almashinuvchi xromatografiya - bu tozalash texnologiyasi boʻlib, unda karboksimetil guruhlari membranaga biriktirilib, funksional modul hosil boʻladi. Ajratish turli biomolekulalarning zaryad xususiyatlari va zaryad zichligidagi farqlar asosida amalga oshiriladi. Ko'pgina biologik makromolekulalar karboksil yoki gidroksil guruhlarini o'z ichiga olganligi sababli, ularning zaryad xususiyatlari va kattaligini bufer eritmasining pH qiymatini o'zgartirish orqali sozlash mumkin. Biomolekulalar qarama-qarshi zaryadga ega bo'lgan membrana moduliga bog'langandan so'ng, elutsiya mobil fazaning ion kuchi yoki pH qiymatini o'zgartirish orqali amalga oshiriladi. Bog'lanish yaqinligi zaifroq bo'lgan molekulalar avval, kuchliroq bog'lanish yaqinligi bo'lgan molekulalar keyinroq elutsiya qilinadi va shu bilan samarali ajratishga erishiladi.

 

2. Mahsulotning afzalliklari

2.1 Tez va samarali: Yuqori bog'lash qobiliyatiga an'anaviy qatron{2}}asosidagi xromatografiyaga qaraganda 40 baravar tezroq oqim tezligida erishish mumkin. Membran xromatografiyasi an'anaviy qadoqlangan{4}}xromatografiya bilan solishtirganda jarayon vaqtini 30-40 marta qisqartirishi mumkin. Odatda ishlaydigan oqim tezligi 10 MV / min.

2.2 Yuqori bog'lanish samaradorligi: Membran xromatografiyasi past bosim tushishi sharoitida yuqori yuklash qobiliyati va yuqori oqim tezligini namoyish etadi, bu modul orqali bir martalik o'tishda zaryadlangan biomolekulalarni ushlashga imkon beradi.

2.3 Masshtabli va moslashuvchan: Membranli xromatografiya mahsulotlarining to‘liq assortimenti jarayonni ishlab chiqishdan tortib yirik{1}}ishlab chiqarishgacha bo‘lgan bosqichlarni qamrab oluvchi biomakromolekulani qayta ishlashning turli ehtiyojlarini qondira oladi. Kapsula dizayni bir martalik{3}}foydalanishga imkon beradi yoki kerak bo'lganda tozalash va qayta foydalanish mumkin.

2.4 Hosildorlikni oshirish: ixcham dizayn ob'ekt izini kamaytiradi. Ustunni qadoqlash, tozalash, tozalashni tekshirish va ustunni saqlash bosqichlarini bartaraf etish orqali ishlov berish nisbatan kichik hajmdagi bufer bilan muvozanatlashgandan keyin boshlanishi mumkin. Ustunni qadoqlash, tozalash yoki saqlashning hojati yo'q, mehnat xarajatlari 50% dan ko'proqqa qisqartirilishi mumkin.

 

3 Texnik parametrlar

3.1 Strukturaviy materiallar

	Laboratoriya shkalasi	kichik miqyosda	Pilot shkalasi	Ishlab chiqarish ko'lami
Membran hajmi	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranani qo'llab-quvvatlash tuzilishi	Polipropilen
Membranli korpus	Polipropilen
O ring	Silikon kauchuk

3.2 Operatsion xarakteristikalari

	Laboratoriya shkalasi	kichik- masshtab	Uchuvchi- shkalasi	Ishlab chiqarish ko'lami
Membran hajmi	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Tavsiya etilgan oqim tezligi	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150 l/min
Maksimal ish harorati	35 daraja
Maksimal ish bosimi	3bar (25 daraja)
Maksimal bosim farqi	3bar (25 daraja)
Saqlash shartlari	20% etanol suvli eritmasi

An'anaviy muhit bilan taqqoslaganda, CM membrana xromatografiyasining xizmat qilish muddati CM agarose gel 6FF bilan solishtirish mumkin.

Shakl 1. Lizozimni tekshirishda ko'p marta qo'llashdan keyin CM membrana xromatografiyasining yuklash qobiliyatidagi o'zgarishlar.

Bundan tashqari, biz hujayra oqsillari va nuklein kislotalarni membrana xromatografiyasi orqali olib tashlash samaradorligini baholadik. Natijalar quyida ko'rsatilgan.

1-jadval. CM membrana xromatografiyasi yordamida CHO-ekspresslangan IgG materialida DNK va xost hujayra oqsillarini olib tashlash tezligi

Bir qator tajribalar shuni ko'rsatdiki, CM membrana xromatografiyasi maqsadli IgG ning yuqori tiklanish tezligini saqlab, ifloslantiruvchi moddalarni samarali ravishda olib tashlashi mumkin.

	DNK				HCP
	IgG-ni tiklash	Tarkib (pg/mg IgG) RT PCR orqali		Olib tashlash omili	Tarkib (ng/mg IgG) Elisa tomonidan		Olib tashlash omili
Yugurish	%	Q membranasidan oldin	Q membranasidan keyin	Jurnal	Q membranasidan oldin	Q membranasidan keyin	Jurnal
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Boshqa brendlar bilan solishtirganda Gudiling CM membrana xromatografiyasidan foydalangan holda, yuklash qobiliyati ma'lumotlari quyida ko'rsatilgan.

Yuklash hajmi (mg/ml)	Jingbiao 1	Yo'naltiruvchi
Lizozim	18	23
Tripsin	17	20

Jadval 2. Raqobatchi mahsulotlar bilan solishtirganda mahsulotimizdagi turli xil oqsillarni yuklash ko'rsatkichlari

Umumiy baholash shuni ko'rsatadiki, bizning yuklash quvvatimiz import qilinadigan mahsulotlar bilan solishtirish mumkin.

Shakl 2. Standart oqsil sifatida lizozimdan foydalangan holda CM membrana kromatografiyasi modulining yuklash qobiliyati testi.

Dinamik yuklash quvvati ham import qilinadigan mahsulotlar bilan solishtirildi. Tekshiruv shuni ko'rsatdiki, lizozimni 160 mM NaCl yordamida elutsiya qilish mumkin, bu ko'pchilik maqsadli oqsillarni samarali ushlashga imkon beradi.

Turli xil elutsiya sharoitlarini optimallashtirish orqali biz membrana xromatografiyasi agaroz jel xromatografiyasiga o'xshash elutsiya xatti-harakatini namoyon etishini aniqladik, bu erda protein tozaligi turli tuz konsentrasiyalarida sezilarli darajada farq qiladi. Amaliy ilmiy-tadqiqot va ishlab chiqarishda yuqori-tozalikdagi maqsadli oqsilni olish uchun muvozanatli elutsiya sharoitlarini miqdoriy jihatdan aniqlash zarur.

 

4. Qo'llashning odatiy holatlari

• DNK, viruslar va xost hujayra oqsillarini olib tashlash
• Plazmidlar, viruslar va oqsillarni ushlash, shuningdek oligonukleotidlarni tozalash
• Xamirturushli fermentatsiya bulonini rangsizlantirish va yuqori-sig'imli oqsilni ushlash

 

5. Ishlash tartibi / Ish jarayoni

5.1: Uskunani tayyorlash va yig'ish:

5.1.1: Membran xromatografiya modulini AKTA xromatografiya tizimiga o'rnating. oqim yo'nalishi modulda belgilangan o'qga mos kelishiga ishonch hosil qiling. Modulni Luer konnektorlari yoki qisqich konnektorlari yordamida ulash mumkin.

5.1.2 Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va moduldan havoni tozalash uchun muvozanat tamponidan foydalaning. Chiqish joyida pufakchalar ko'rinmaguncha yuvishni davom ettiring, so'ngra o'tkazgich chiqishini xromatografiya tizimiga ulang.

5.2.:foydalanishdan oldingi-tayyorlash

5.2.1: Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va membrana muvozanatga kelishini ta'minlash uchun 0,5 M NaOH yordamida 5 MV dan ortiq vaqt davomida oldindan tozalashni amalga oshiring.

5.2.2: Bir xil oqim tezligi sharoitida membrana muvozanatga kelishini ta'minlash uchun -1 M NaCl bilan 5 MV dan ortiq vaqt davomida dastlabki ishlov berishni bajaring.

5.3. Xromatografiya jarayoni

5.3.1 Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va membrana muvozanat holatiga kelgunga qadar 5 MV dan ortiq muvozanat buferi bilan-oldindan ishlov berishni bajaring.

5.3.2 0,22 mkm -oldindan filtrlashdan so'ng, namunani ustunga yuklang va butun namuna qo'llanilguncha yoki xromatografiyani yuklash qobiliyatiga yetguncha davom eting.

5.3.3 UV qiymati asosiy darajaga tushmaguncha 10 MV dan ortiq muvozanat buferi bilan yuving.

5.3.4 Jarayon loyihasiga ko'ra, gradient elyusiya yoki chiziqli elyusiya tizimini qo'llang va kerak bo'lganda fraksiyalarni segmentlarga to'plang.

5.4 CIP{1}}foydalanishdan keyingi ishlov berish – membrana xromatografiyasi tizimi uchun CIP (-joyida tozalang-).

5.4.1 Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va UV qiymati bazaviy qiymatdan pastga tushguncha 1 M NaOH bilan 10 MV dan ortiq vaqt davomida davolang.

5.4.2 Sirkulyant yuvishdan 30 daqiqa o'tgach, pH 7 dan 8 gacha bo'lguncha suv bilan yuvib tashlang, so'ngra 20% etanolga o'ting va o'tkazuvchanlik deyarli o'zgarmaguncha tozalashni davom eting.

5.5 Membran xromatografiyasini saqlash

Foydalanish va CIP tugagandan so'ng, membrana moduli olib tashlanishi va 20% etanolda namlash orqali saqlanishi yoki xona haroratida 20% etanol o'z ichiga olgan eritmada onlayn saqlanishi mumkin. 20% etanol eritmasi muntazam tekshirilishi va almashtirilishi kerak.

 

6, Buyurtma haqida ma'lumot

CM{0}}tipi zaif kation almashinadigan membrana xromatografiyasi kapsula filtri

	Laboratoriya shkalasi	Kichik miqyosda	Pilot shkalasi	Ishlab chiqarish ko'lami
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Membran maydoni	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Issiq teglar: sp kuchli kation almashinuvi membranasi xromatografiyasi, Xitoy, etkazib beruvchilar, ishlab chiqaruvchilar, zavod, ulgurji, ommaviy, stokda, bepul namuna