DEAE zaif anion almashinuvi membranasi xromatografiyasi

DEAE zaif anion almashinuvi membranasi xromatografiyasi - mahsulotga kirish

 

1. Umumiy ko‘rinish

DEAE zaif anion almashinuvi xromatografiyasi turli biomolekulalarning zaryad xususiyatlari va zaryad zichligidagi farqlarga asoslangan tozalash usulidir. Ko'pgina biomakromolekulalar karboksil yoki gidroksil guruhlari kabi funktsional guruhlarni o'z ichiga olganligi sababli, ularning zaryad xususiyatlari va kattaligi bufer eritmasining pH qiymatini o'zgartirish orqali sozlanishi mumkin. Biomolekulalar qarama-qarshi zaryadlangan anion yoki kation almashinadigan muhitga bog'langandan so'ng, ajralish ion kuchini yoki mobil fazaning pH ni o'zgartirish orqali amalga oshiriladi. Bog'lanish yaqinligi zaifroq bo'lgan molekulalar avval, keyin esa kuchliroq bog'lanish yaqinligi bo'lgan molekulalar elutsiya qilinadi va shu bilan samarali ajratishni amalga oshiradi.

 

2. Mahsulotning afzalliklari

2.1 Yuqori samaradorlik: qatronlar asosidagi xromatografiyaga qaraganda 40 baravar yuqori oqim tezligida kuchli bog'lanishga erishadi-. Membran xromatografiyasi an'anaviy qadoqlangan{4}}xromatografiya bilan solishtirganda jarayonning umumiy vaqtini taxminan 30-40 baravar qisqartiradi.

2.2 Yuqori bog'lanish samaradorligi: Membran xromatografiyasi past bosim tushishi ostida yuqori bog'lanish qobiliyatini va yuqori oqim tezligini namoyish etadi, bu esa zaryadlangan biomolekulalarni ustundan bir marta o'tishda qo'lga olish imkonini beradi.

2.3 Masshtabli va moslashuvchan: Membranli xromatografiya mahsulotlarining to‘liq seriyasi jarayonni ishlab chiqishdan tortib yirik{1}}ishlab chiqarishgacha bo‘lgan barcha bosqichlarni qamrab oluvchi biomakromolekulani tozalashning turli ehtiyojlarini qondira oladi. Kapsula{3}}turi konstruktiv dizayni bir martalik foydalanishni ham, tozalashdan keyin ham qayta foydalanishni qoʻllab-quvvatlaydi.

2.4 Yaxshilangan mahsuldorlik: ixcham dizayn ob'ekt izini kamaytiradi. Ustunlarni qadoqlash, tozalash, tozalashni tekshirish va ustunlarni saqlash tartib-qoidalarini bekor qilish orqali tizim to'g'ridan-to'g'ri bufer muvozanatidan so'ng ustunlarni qadoqlash yoki saqlashsiz ishlashi mumkin. Ish haqini 50% gacha kamaytirish mumkin.

 

3. Texnik parametrlar

3.1 Strukturaviy materiallar

	laboratoriya shkalasi	kichik miqyosda	uchuvchi shkala	ishlab chiqarish ko'lami
Membran hajmi	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranani qo'llab-quvvatlash tuzilishi	Polipropilen (PP)
Membranli korpus	Polipropilen (PP)
O ring	Silikon

3.2 Ishlash xususiyatlari

	laboratoriya shkalasi	kichik miqyosda	uchuvchi shkala	Ishlab chiqarish ko'lami
Membran hajmi	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Tavsiya etilgan oqim tezligi	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150 l/min
Maksimal ish harorati	35 daraja
Maksimal ish bosimi	3bar (25 daraja)
Maksimal differentsial bosim	3bar (25 daraja)
Saqlash shartlari	20% língínmín 20% etanol suvli eritmasi

Shakl 1. BSA bilan kuzatilgan ko'p foydalanishdan so'ng membrana xromatografiyasini yuklash qobiliyatidagi o'zgarishlar.

Bundan tashqari, biz DEAE membran kromatografiyasi yordamida xost hujayra oqsillari va nuklein kislotalarni olib tashlash samaradorligini baholadik. Natijalar quyidagicha.

	DNK				HCP
	IgG-ni tiklash	Tarkib (pg/mg IgG) RT PCR orqali		Olib tashlash omili	Tarkib (ng/mg IgG) Elisa tomonidan		Olib tashlash omili
Yugurish	%	DEAE membranasidan oldin	DEAE membranasidan keyin	Jurnal	DEAE membranasidan oldin	DEAE membranasidan keyin	Jurnal
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

1-jadval. DEAE membrana xromatografiyasi yordamida CHO-ekspresslangan IgG dan DNK va xost hujayra oqsillarini olib tashlash tezligi.

Bir qator tajribalar shuni ko'rsatdiki, Q membrana xromatografiyasi maqsadli IgG ning yuqori tiklanish tezligini saqlab qolgan holda ifloslanishlarni samarali ravishda olib tashlashi mumkin.

Bundan tashqari, biz Gudiling membranasi xromatografiyasini import qilingan brendlar bilan solishtirdik va yuklash hajmi ma'lumotlari quyidagicha.

Shakl 2. Bizning membrana xromatografiyasi va raqobatchi mahsulotlarga turli xil oqsillarni yuklash ko'rsatkichlari

Umumiy baholash shuni ko'rsatadiki, bizning yuklash quvvatimiz import qilinadigan mahsulotlar bilan solishtirish mumkin.

Shakl 3. Kollagen oqsilini sinashda DEAE membran kromatografiyasi modulining ishlashi

DEAE membrana xromatografiyasi modulidan foydalangan holda tekshirish natijalari ko'pchilik maqsadli kollagen oqsillarini 135 mM NaCl yordamida ushlash va elutsiya qilish mumkinligini ko'rsatdi.

Turli xil elyusiya sharoitlarida sinovdan o'tkazish orqali biz membrana xromatografiyasi va agaroz jel xromatografiyasi o'xshash elutsiya xatti-harakatini ko'rsatishini aniqladik, bu erda protein tozaligi turli xil tuz konsentrasiyalarida sezilarli darajada farq qiladi. Amaliy ilmiy-tadqiqot va ishlab chiqarishda yuqori-tozalikdagi maqsadli oqsillarni olish uchun optimal muvozanatli elyusiya sharoitlarini miqdoriy jihatdan aniqlash zarur.

 

4. Klassik amaliy holatlar

DNK, viruslar, mezbon hujayra oqsillari va endotoksinlarni olib tashlash

Plazmidlar, viruslar, nuklein kislotalar va oqsillarni ushlash, shuningdek oligonukleotidlarni tozalash

 

5. Operatsion ish jarayoni

5.1: Uskunani tayyorlash va yig'ish

5.1.1 Membran xromatografiya moduli AKTA xromatografiya tizimiga o'ralgan qatron ustunlariga o'xshash tarzda o'rnatilishi kerak, bunda oqim yo'nalishi o'qlar va kirish yo'nalishi bilan mos kelishini ta'minlaydi. Luer konnektorlari yoki qisqich qismlari yordamida ulang.

5.1.2 Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va havoni tozalash uchun muvozanat tamponidan foydalaning. Chiqish joyida pufakchalar ko'rinmaguncha yuvishni davom eting, so'ngra o'tkazgich chiqishini xromatografiya tizimiga ulang.

5.2:Foydalanishdan oldingi-davolash

5.2.1: Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va membrana muvozanatga kelishini ta'minlash uchun -5 MV dan ortiq 0,5 M NaOH bilan oldindan ishlov bering.

5.2.2: Xuddi shu oqim tezligi ostida, membrana muvozanat holatiga kelishini ta'minlash uchun-5 MV dan ortiq muvozanat buferi (1× PBS) bilan qayta ishlang.

5.3 Xromatografiya jarayoni

5.3.1

Kirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va membrana muvozanatga kelguncha-5 MV dan ortiq muvozanat buferi bilan oldindan ishlov bering.

5.3.2

Namuna 0,22 mkm filtrdan-oldindan filtrlangandan so'ng, yuklash tugaguncha yoki xromatografiya yuklash imkoniyatiga yetguncha namunani yuklang.

5.3.3

10 MV dan ortiq muvozanat buferi bilan ultrabinafsha nurlanishining absorbsiyasi boshlang'ich darajaga tushguncha yuving.

5.3.4

Jarayon dizayniga ko'ra gradient elyusiyasi yoki chiziqli elyusiyadan foydalaning va kerak bo'lganda namunalarni fraktsiyalarda to'plang.

5.4, ​​CIP{1}}foydalanishdan keyingi ishlov berish – membrana xromatografiya qurilmasining CIP

5.4.1

Kirish oqimining tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va UV nurlanish darajasi asosiy qiymatdan pastga tushmaguncha, 0,5 M NaOH bilan 10 MV dan ortiq vaqt davomida tozalashni (CIP) bajaring.

5.4.2

30 daqiqa davomida aylanma yuvishdan so'ng, pH 7-8 gacha bo'lguncha suv bilan yuvishga o'ting, so'ngra o'tkazuvchanlik deyarli o'zgarmas bo'lguncha 20% etanol bilan tozalashni davom eting.

5.5, Membran xromatografiyasini saqlash:

Foydalanish va CIP tugagandan so'ng, membrana moduli olib tashlanishi va 20% etanolda namlash orqali saqlanishi yoki xona haroratida 20% etanol eritmasida onlayn saqlanishi mumkin. 20% etanol eritmasi vaqti-vaqti bilan tekshirilishi va almashtirilishi kerak.

 

6. Buyurtma haqida ma'lumot

DEAE{0}}tipi zaif anion almashinadigan membrana xromatografiyasi kapsula filtri

	Laboratoriya-shkalasi	kichik miqyosda	Pilot shkalasi	Ishlab chiqarish ko'lami
Mahsulot modeli	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Membran hajmi	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Issiq teglar: deae zaif anion almashinuvi membranasi xromatografiyasi, Xitoy, etkazib beruvchilar, ishlab chiqaruvchilar, zavod, ulgurji, ommaviy, stokda, bepul namuna