CM zaif ion-almashinadigan membrana xromatografiyasi

SP Kuchli kation almashinuvi membranasi xromatografiyasi mahsulotiga kirish 

 

2. Mahsulotning afzalliklari

Tez va samarali Yuqori bog'lanish qobiliyatiga an'anaviy qatronlar xromatografiyasidan 40 barobar tezroq oqim tezligida erishish mumkin. An'anaviy qatron{2}}asosidagi xromatografiya bilan solishtirganda, membrana xromatografiyasi yordamida jarayon vaqtini 30-40 martaga qisqartirish mumkin. Odatda ishlaydigan oqim tezligi taxminan 10 MV / min.

2.2 Yuqori bog'lanish samaradorligi Membran xromatografiyasi yuqori bog'lanish qobiliyatini va past bosim tushishida yuqori oqim tezligini namoyish etadi, bu modul orqali bir martalik o'tishda zaryadlangan biomolekulalarni ushlashga imkon beradi.

2.3 Masshtabli va moslashuvchan Membranli xromatografiya mahsulotlarining to‘liq assortimenti biomolekulalarni tozalashning turli ehtiyojlarini qondira oladi, bu jarayonni ishlab chiqishdan tortib yirik{1}}miqyosdagi ishlab chiqarishgacha bo‘lgan ilovalarni qamrab oladi. Kapsula dizayni bir martalik-foydalanishga imkon beradi yoki tegishli tozalash tartib-qoidalaridan so'ng tozalanishi va qayta ishlatilishi mumkin.

2.4 Yaxshilangan mahsuldorlik Yilni dizayn ob'ektning o'z izini minimallashtiradi. Ustunni qadoqlash, tozalash, tozalashni tekshirish va ustunni saqlash kabi operatsiyalarni bartaraf etish orqali ishlov berish nisbatan kamroq bufer bilan oddiy muvozanatdan keyin boshlanishi mumkin. Ustunni qadoqlash, tozalash yoki saqlashga hojat yo'qligi sababli, mehnat xarajatlarini 50% dan ko'proq kamaytirish mumkin.

 

 

3 Texnik parametrlar

3.1 Strukturaviy materiallar

	Laboratoriya shkalasi	kichik miqyosda	uchuvchi shkala	ishlab chiqarish ko'lami
membrana hajmi	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membranani qo'llab-quvvatlash tuzilmasi	Polipropilen
membrana korpusi	Polipropilen
O ring	Silikon

3.2 Operatsion xarakteristikalari

	Laboratoriya shkalasi	kichik miqyosda	uchuvchi shkala	ishlab chiqarish ko'lami
membrana hajmi	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Tavsiya etilgan oqim tezligi	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150 l/min
Maksimal ish harorati	35 daraja
Maksimal ish bosimi	3bar (25 daraja)
Maksimal bosim farqi	3bar (25 daraja)
Saqlash shartlari	20% etanolanavbatlisolutsiya

Taqqoslash shuni ko'rsatadiki, SP membranasi xromatografiyasining xizmat qilish muddati SP Sepharose 6FF bilan solishtirish mumkin.

Shakl 1. Lizozim bilan bir necha marta qo'llashdan keyin SP membranasi xromatografiyasining bog'lanish qobiliyatining o'zgarishi

Bundan tashqari, biz membrana xromatografiyasini mezbon hujayra oqsillari va nuklein kislotalarni olib tashlash samaradorligi uchun baholadik. Natijalar quyidagicha:

	DNK				HCP
	IgG-ni tiklash	Tarkib (pg/mg IgG) RT PCR orqali		Olib tashlash omili	Tarkib (ng/mg IgG) Elisa tomonidan		Olib tashlash omili
Yugurish	%	Q membranasidan oldin	Q membranasidan keyin	Jurnal	Q membranasidan oldin	Q membranasidan keyin	Jurnal
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

1-jadval. SP membrana xromatografiyasi yordamida CHO-ekspresslangan IgG materialida DNK va xost hujayra oqsilini olib tashlash tezligi

Bir qator tajribalar shuni ko'rsatdiki, SP membrana xromatografiyasi maqsadli IgG ning yuqori tiklanish tezligini saqlab, ifloslantiruvchi moddalarni samarali ravishda olib tashlashi mumkin.

Gudiling SP membrana xromatografiyasini import qilingan brendlar bilan solishtirganda, bog'lash qobiliyati ma'lumotlari quyidagicha:

Bog'lashctezkorlik (mg/ml)	Sartorius	PALL	Yo'naltiruvchi
Lizozim	25	32	29
Tripsin	22	27	25

2-jadval. Mahsulotimiz va raqobatdosh brendlarimizdagi turli oqsillarning bog‘lanish qobiliyati

Umumiy baholash shuni ko'rsatadiki, bizning bog'lash quvvatimiz import qilinadigan mahsulotlar bilan solishtirish mumkin.

Shakl 2. Standart sifatida lizozimdan foydalangan holda SP membrana xromatografiya modulining bog'lanish qobiliyati sinovi

Dinamik bog'lanish qobiliyati va import qilinadigan mahsulotlar bilan solishtirganda, ko'pchilik maqsadli oqsillarni 190 mM NaCl da lizozim elutsiya qilinganda ushlash mumkinligi tasdiqlandi.

Turli xil elyusiya sharoitlari orqali biz membrana xromatografiyasining elutsiya profillari agaroz gelnikiga o'xshashligini aniqladik, ammo oqsillarning tozaligi turli tuz konsentrasiyalarida sezilarli darajada farq qiladi. Haqiqiy ilmiy-tadqiqot va ishlab chiqarishda yuqori-tozalikdagi maqsadli oqsillarni olish uchun optimal elutsiya sharoitlarini miqdoriy jihatdan aniqlash zarur.

 

4 Qo'llashning odatiy holatlari

DNK, viruslar va mezbon hujayra oqsillarini olib tashlash

Plazmidlar, viruslar, oqsillarni ushlash va oligonukleotidlarni tozalash

Xamirturushli fermentatsiya bulonidan pigmentlarni olib tashlash va yuqori-sig'imli oqsilni ushlash

 

5 Foydalanish tartibi

5.1 Uskunani tayyorlash va yig'ish:

5.1.1: Oqim yo'nalishi modul strelkalari va kirish yo'nalishi bilan mos kelishini ta'minlab, qatron ustunlariga o'xshash protseduralarni bajarib, membrana xromatografiya modulini ÄKTA xromatografiya tizimiga o'rnating. Tizimga xavfsiz integratsiya qilish uchun modulni Luer qulflari yoki qisqichlar-uslubi yordamida ulang.

5.1.2 Oziqlantirish oqimi tezligini o'rnating5–10 MV/minva modulni muvozanat buferi yordamida gazsizlang, oqava suvda havo pufakchalari yo'qligiga ishonch hosil qiling. Gazsizlangandan so'ng, o'tkazgichning chiqishini xromatografiya tizimiga ulang.

5.2:-Foydalanishdan oldingi davolash:

5.2.1:

Oziqlantirish oqimi tezligini o'rnating5–10 MV/minbilan oldindan-davolash qiling5 MV dan ortiq uchun 0,5 M NaOH, membrananing to'liq muvozanatga erishishini ta'minlash.

5.2.2: Xuddi shu oqim tezligida, oldindan ishlov berishni-o'tkazing5 MV dan ortiq uchun 1 M NaClmembrananing to'liq muvozanatga erishishini ta'minlash.

5.3 Xromatografiya jarayoni

5.3.1 Besleme oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va membranani to'liq muvozanatga kelguncha 5 MV dan ortiq muvozanat buferi bilan muvozanatlashtiring.

5.3.2 0,22 mkm -oldindan filtrlashdan so'ng, namunani yuklash tugaguncha yoki xromatografik bog'lanish qobiliyatiga yetguncha, namunani membranaga yuklang.

5.3.3 UV signali asosiy chiziqqa qaytguncha 10 MV dan ortiq muvozanat buferi bilan yuving.

5.3.4 Jarayon loyihasiga muvofiq gradient elyusiyasini yoki bosqichma-bosqich elyusiyani qo'llang va kerak bo'lganda fraktsiyalarni to'plang.

5.4 CIP Post-Davolashdan foydalanish – Membran xromatografiya qurilmasi CIP (joyida tozalash)

5.4.1 Oziqlantirish oqimi tezligini 5–10 MV/min ga o'rnating va ultrabinafsha nurlanish signali asosiy chiziqdan pastga tushguncha 1 M NaOH bilan 10 MV dan ortiq tozalashni amalga oshiring.

5.4.2 30 daqiqa sirkulyatsiya qilgandan so'ng, pH 7-8 ga yetguncha suv bilan yuvishga o'ting, so'ngra o'tkazuvchanlik deyarli o'zgarmasga qadar 20% etanol bilan tozalashni davom eting.

5.5 Membran xromatografiyasini saqlash

Foydalanish va CIP tugagandan so'ng, membrana modulini 20% etanolga namlash orqali olib tashlash va saqlash mumkin yoki uni xona haroratida 20% etanol bo'lgan eritmada-liniyada saqlash mumkin. 20% etanol eritmasi vaqti-vaqti bilan tekshirilishi va almashtirilishi kerak.

 

6. Buyurtma haqida ma'lumot

Q Kuchli anion almashinadigan membrana xromatografiyasi kapsula filtri

	Laboratoriya shkalasi	kichik miqyosda	uchuvchi shkala	ishlab chiqarish ko'lami
Mahsulot modeli	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Membran hajmi	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Issiq teglar: sm zaif ion-almashinadigan membrana xromatografiyasi, Xitoy, etkazib beruvchilar, ishlab chiqaruvchilar, zavod, ulgurji, ommaviy, stokda, bepul namuna