Sigir yuqumli rinotraxeit (IBR) vaktsinasini sanoat-miqyosida quyi oqimda tozalash jarayoni — “Ultrafiltratsiya” bo‘limi

Qoramolning yuqumli rinotraxeiti (IBR) sigirlarning yuqumli rinotraxeit virusi (IBRV), shuningdek, sigir gerpesvirusi 1 (BHV-1) deb ham ataladigan infektsiyadan kelib chiqadi. Kasallik asosan nafas olish belgilari va abort bilan tavsiflanadi. Ushbu klinik ko'rinishlarga qo'shimcha ravishda, IBR sutli qoramollarda sut mahsuldorligining pasayishiga va go'shtli qoramollarning vaznining kamayishiga olib kelishi mumkin, bu esa chorvachilik fermalarida sezilarli iqtisodiy yo'qotishlarga olib keladi.

Kasallik tabiatda immunosupressivdir. Yagona infektsiya sifatida yuzaga kelganda, uning patogenligi nisbatan past; ammo, boshqa virusli yoki bakterial kasalliklar bilan aralashgan infektsiyalar yuzaga kelganda, zo'ravonlik va zarar sezilarli darajada oshadi. Emlash profilaktika va nazorat qilishning eng samarali usuli bo'lib, ikkita asosiy turdagi vaktsinalar mavjud: jonli zaiflashtirilgan vaksinalar va inaktivlangan vaktsinalar. Hozirgi vaqtda fermer xo'jaliklarida qo'llaniladigan qoramol yuqumli rinotraxeit vaktsinalari asosan inaktivatsiyalangan vaktsinalardir.

Jonli zaiflashtirilgan vaktsinalar kuchli immunogenlik, immunitetning tez paydo bo'lishi va uzoq muddatli himoya (odatda olti oydan ortiq) bilan tavsiflanadi. Ular odatda kasallik avj olgan paytda favqulodda emlash uchun ishlatiladi. Biroq, ular virus tarqalishining potentsial xavfini o'z ichiga oladi, homilador sigirlar uchun xavf tug'diradi va yashirin infektsiyalangan, ammo asemptomatik qoramollarda qo'llanilmaydi.

Inaktivatsiyalangan vaktsinalar yuqori xavfsizlik bilan ajralib turadi, virusning tarqalishi yoki virulentlikka qaytish xavfi yo'q va mutlaqo xavfsiz hisoblanadi. Ular qoramolda barcha bosqichlarda, jumladan, homilador sigirlar, buzoqlar va nasldor buqalarda qo'llanilishi mumkin. Biroq, immunitetning boshlanishi nisbatan sekin va himoya muddati qisqaroq, shuning uchun odatda kuchaytiruvchi emlashlar talab qilinadi. Ba'zi hollarda himoya samaradorligi jonli zaiflashtirilgan vaktsinalarga qaraganda zaifroq bo'lishi mumkin.

Tirik zaiflashtirilgan vaktsina yoki inaktivatsiyalangan vaktsina qo'llanilishidan qat'i nazar, quyi oqimdagi tozalash jarayonini to'rtta asosiy bosqichga bo'lish mumkin: yig'ish va tozalash → kontsentratsiya va birlamchi tozalash → abraziv tozalash → inaktivatsiya/steril filtrlash va shakllantirish.

Konsentratsiya vaktsinalarni aniqlashtirishdan so'ng darhol tozalash jarayonining asosiy bosqichidir. Uning asosiy maqsadi virus bioaktivligini saqlab qolgan holda, yig‘ib olingan katta{1}}hajmli, past{2}}konsentratsiyali virusli tiniqlashtirilgan eritmani tezda kichik-hajmli, yuqori-konsentratsiyali shaklga keltirishdir. Bu xromatografiya kabi keyingi yuqori{6}}ravshanlik, lekin past{7}}tasirli nozik tozalash bosqichlari uchun zarur shart-sharoitlarni yaratadi.

Ushbu bosqich odatda tangensial oqim ultrafiltratsiyasi (TFF) yordamida amalga oshiriladi. Printsip quyidagicha: virusli ozuqa eritmasi ma'lum bir teshik o'lchamiga ega bo'lgan ultrafiltratsiya membranasi yuzasiga parallel ravishda oqadi. Bosim ostida suv, tuzlar va ma'lum aralashmalar kabi kichik molekulalar membranadan perpendikulyar ravishda o'tadi va chiqariladi, membrana teshiklaridan ancha katta bo'lgan buzilmagan virus zarralari esa ushlab turiladi, doimiy ravishda qayta aylanadi va konsentratsiyalanadi. An'anaviy yuqori{3}}tezlikli santrifüjlash bilan solishtirganda, bu usul lipidli konvertga ega bo'lgan IBRV kabi nozik viruslar uchun yumshoqroq. U yuqori siljish kuchlari tufayli virusning strukturali shikastlanishi va faollik yo'qotilishini samarali kamaytiradi va sanoat ishlab chiqarishi uchun chiziqli miqyos-ko'proq mos keladi.

Muvaffaqiyatli konsentratsiyali operatsiya shunchaki hajmni kamaytirishdan ko'ra ko'proq narsani anglatadi. Jarayonni optimallashtirishning asosiy nuqtalari quyidagilardan iborat: filtrlash samaradorligini muvozanatlash uchun transmembran bosimi va ozuqa oqimi tezligini aniq nazorat qilish va kontsentratsiyaning polarizatsiyasi va membranani ifloslanishini minimallashtirish; virusni yuqori darajada ushlab turish va o'tkazuvchanlik oqimini ta'minlash uchun tegishli membrana materialini va gözenek hajmini tanlash; va virusni tiklash, konsentratsiya omili va ishlov berish vaqti o'rtasidagi optimal muvozanatni topish. Konsentrlangan virus suspenziyasi nafaqat sezilarli darajada yuqori titrga erishadi, balki suvda eruvchan aralashmalarning katta qismini- olib tashlash orqali dastlabki tozalashga ham erishadi. Bu xromatografiya va nukleaz bilan ishlov berish kabi keyingi muhim takomillashtirish bosqichlari uchun zarur hajm va kontsentratsiya asosini ta'minlaydi va konsentratsiyani butun quyi oqim jarayonida markaziy samaradorlik markaziga aylantiradi.

Ikkilamchi diafiltratsiya vaktsinani quyi oqimdan tozalashning muhim bosqichi bo'lib, nozik tozalashdan keyin va formuladan oldin joylashtiriladi. Odatda xromatografiya va nukleaz bilan ishlov berishdan keyin amalga oshiriladi. Uning asosiy maqsadi dastlabki konsentratsiya emas, balki tizim almashinuvi va yakuniy formulaning shartlarini aniq sozlashdir. Jarayon tangensial oqimli ultrafiltratsiya (TFF) tizimida amalga oshiriladi, bunda aylanma kontsentrlangan virusli eritmaga doimiy ravishda yangi, toza formulali tampon qo'shiladi, ayni paytda asl erituvchi va kichik{3}}molekula aralashmalari chiqariladi. Ushbu operatsiya qoldiq tuzlarni, organik erituvchilarni, nukleaz degradatsiyasi mahsulotlarini va tozalash jarayonida qolgan eruvchan aralashmalarni samarali va yumshoq tarzda yo'q qiladi.

Asosiysi, virus kontsentratsiyasi formula spetsifikatsiyalariga mos kelishini ta'minlash uchun doimiy hajmni saqlab turish yoki kichik konsentratsiyani o'zgartirishni qo'llashdir. Sigir infektsion rinotraxeit virusi (IBRV) kabi zaif, o'ralgan viruslar uchun ikkilamchi diafiltratsiyaning yumshoq gidrodinamik muhiti zarrachalarning yaxlitligi va immunogenligini saqlash uchun juda muhimdir. Oxir oqibat, bu qadam keyingi inaktivatsiya (agar kerak bo'lsa), yordamchi yoki stabilizator qo'shilishi va yakuniy to'ldirish uchun mustahkam asos bo'lib, yakuniy mahsulot belgilangan komponentlar, bir xil sharoitlar va yaxshi muvofiqlik bilan formulaga kirishini ta'minlaydi. Shuning uchun bu vaktsina xavfsizligi, barqarorligi va partiyadan partiyaga-vaktsina xavfsizligini taʼminlashning asosiy bosqichlaridan biridir.

IBRV konvertli, ikki-torli chiziqli DNK virusi boʻlib, taxminan sferik konvertga ega. Yetuk IBRV zarralari diametri taxminan 160-230 nm. Shunga ko'ra, 100, 300 yoki 500 kDa ultrafiltratsiya membranalaridan foydalanish ba'zi ifloslantiruvchi oqsillarni olib tashlagan holda IBRVni saqlab qolishi mumkin. Jiuling Technology membrana kassetalarining ultrafiltratsiyani tiklash darajasi ozuqa materialining turiga qarab o'zgaradi, lekin odatda 90-95% ga etadi.